Влияние аминокислоты L-лизина на репликацию HIV-1 RNA in vitro

Abstract

Objective: Our aim was to determine in this pilot study the direct effect of L-lysine amino acid on HIV-1 RNA replication in vitro. Methods: For evaluation of the effects of essential L-lysine amino acid on HIV-1 RNA replication level, we used a model of amino acid-excess system in vitro following incubation of plasma samples for 24 hours at 25°C. Quantitative HIV-1 RNA assay was performed using (RT-PCR) reverse-transcriptase polymerase chain reaction (Rotor-Gene Q, QIAGEN, Germany) with a sensitivity limit of 500 HIV-1 RNA copies/ml. A laboratory survey of immune function was conducted by use of a flow cytometer according to the method, defining CD3, CD4 and CD8 lymphocytes count (Coulter Epics XL, Beckman Coulter, USA). Results: We found that in plasma of the same HIV- infected patients after adding L-lysine and following incubation in vitro, viral load increased significantly in comparison with standard samples. Conclusions: There was evidence for an association between L-lysine supplementation and HIV-1 RNA replication. High intake of L-lysine amino acid may increase the risk of high viral load, subsequent acceleration of immunosuppression and HIV progression.

Цель исследования - оценка влияния аминокислоты L-лизина на уровень репликации РНК ВИЧ-1 in vitro. Материалы и методы. Выполнены три серии экспериментов с использованием модели инкубации образцов плазмы in vitro и последующим определением уровня вирусной нагрузки в группах ВИЧ-инфицированных пациентов, не принимающих антиретровирусные препараты и на фоне терапии. В первой серии, плазма, обогащенная аутологичными мононуклеарными клетками периферической крови, инкубировалась в течение 24 часов при 25 °С. Во второй серии, в исследуемый образец добавляли 10,0 мг аминокислоты L-лизина с последующей аналогичной схемой инкубации. На третьем этапе зксперимента L-лизин был заменен на L-аргинин. Определение уровня РНК ВИЧ-1 выполнено методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием коммерческого комплекта (АмплиСенс®, ВИЧ-монитор-FRT, Россия) с пределом чувствительности 500 копий РНК ВИЧ-1 в мл, на амплификаторе с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени» (Rotor-Gene Q, QIAGEN, Германия). Лабораторная методика оценки параметров клеточного иммунитета у ВИЧ-позитивных лиц проводилась на проточном цитометре (Coulter® Epics XL, Beckman Coulter, США) по стандартной методике, с определением уровня CD3, CD4, CD8 лимфоцитов в реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) с помощью моноклональных антител. Результаты. Установлено, что после суточной инкубации, вирусная нагрузка возрастает в 1,5 раза. При инокуляции аминокислоты L-лизина в образцы плазмы, количество копий РНК ВИЧ-1 достоверно увеличивается в 4,5 раза. При замене L-лизина на L-аргинин аналогичного изменения уровня вирусной нагрузки не зафиксировано. Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о наличии достоверного влияния L-лизина на динамику репликации ВИЧ-1. Результатами настоящего исследования предполагается, что избыток незаменимой аминокислоты увеличивает уровень вирусной нагрузки, патогенетически усугубляя иммуносупрессию и способствуя клиническому прогрессированию заболевания.