Роль фенотипического смешивания в формировании структуры популяции клонированного вируса ЕСН011 в отношении аффинитета к рецептору DAF (DD55)

Abstract

This work was aimed at evaluation of the effect of phenotypic mixing on the population structure of cloned echovirus 11 (EV11) concerning its affinity to DAF (CD55) receptor. Viral population was separated according to phenotype by treatment with human erythrocytes. It was determined that the population of Daf+ EV11 clone after propagation on RD cell line was heterogeneous in respect to affinity to DAF receptor. The majority of virions were bound by DAF expressed on erythrocytes, whereas approximately 0.1 % of the original population did not interact with DAF, i.e. possessed Daf- phenotype. Direct sequencing of the structural part of the viral genome was carried out for the subpopulation with Daf- phenotype and for 5 clones derived from that subpopulation. No difference of the nucleotide sequence was detected in comparison with the original Daf+ clone. The usage of monoclonal antibodies (BRIC216) to DAF demonstrated equal inhibitory effects on the reproduction of the original Daf+ clone and on the reproduction of the subpopulation with Daf- phenotype. Results obtained in this study allow us to speculate that generation of phenotypic Daf- variants was a consequence of daf+ genome incapsidation into Daf- capsid, and the latter being the product of mutant daf- genome translation.

Целью настоящей работы являлась оценка влияния фенотипического смешивания на структуру популяции клонированного вируса ЕСН011 (EV11) в отношении сродства к рецептору DAF (CD55). Методом разделения популяции по фенотипу с помощью обработки эритроцитами человека установлено, что популяция Daf+ клона EV11, полученного в культуре клеток RD, гетерогенна в отношении сродства к рецептору DAF. Преобладающая часть вирионов взаимодействовала с рецептором DAF на эритроцитах, в то время как приблизительно 0,1% инфекционных частиц не взаимодействовали с DAF, то есть имели Daf- фенотип. Прямое секвенирование структурной части вирусного генома, выполненное для субпопуляции вирионов с Daf- фенотипом, а также для пяти клонов, выделенных из зтой субпопуляции, не выявило отличий нуклеотидной последовательности по сравнению с исходной популяцией Daf+ клона. С помощью моноклональных антител (BRIC216) к рецептору DAF, была показана одинаковая эффективность ингибирования репродукции как исходного Daf+ клона, так и субпопуляции вирионов с D af-фенотипом. Полученные результаты позволяют утверждать, что образование фенотипических Daf- вариантов вызвано инкапсидацией daf+ генома в Daf- капсид, белки которого являются продуктом трансляции мутантного daf- генома.